细胞抱团一定代表细胞状态不好吗？

　　细胞生长的时候肯定是要相互联系，大部分的细胞都是要成片生长的，应该仔细观察每种细胞的状态，抱团并不一定代表不好：

　　1. 若细胞轮廓清晰，可看清楚一个个的细胞，像葡萄一样，一串串的，是状态好的，说明细胞在分裂。

　　2. 但大部分细胞抱团绝对不是一件好事！如果轮廓消失，出现细胞融解或细胞变灰暗、透光性变差，就是细胞死亡了。葡萄状和抱团，在镜下其实很容易区别。抱团死亡的细胞可以看到细胞碎片

　　细胞成团的原因

　　1、消化的过程过于粗暴，吹打太用力，消化过久，消化液太强或有毒性等会导致细胞死亡。细胞死亡后会释放出DNA，缠绕其他细胞，形成黏性的细胞团。

　　2、细胞离心速度过大或时间太长，也容易造成细胞抱团。

　　3、消化不完全的时候，细胞和细胞之间的连接没有分开；消化过度的时候，圆形的细胞容易聚堆，再分开很困难。

　　4、状态不好、老化的细胞，也可能会出现抱团生长的情况（比如换液不及时、长得太满才传代、污染等造成的细胞状态差）。

　　5、传代时没有吹打均匀，细胞团多，培养时就会是一团一团的。

　　6、传代后细胞铺板不均匀。

　　7、有可能是杂细胞，或者死细胞。

　　8、接种不均匀，或者是细胞未消化开。

　　9、非震荡培养或细菌（胞）量过多的话就会成团。

　　如何避免细胞成团？

　　首先确认当前细胞生长密度及状态，80%左右的生长密度即可进行传代，此时细胞状态较好，且用于传代的数量也足够。

　　传代操作前，使用缓冲液对细胞进行适当且全面地润洗，清除死亡的细胞团和部分堆叠杂质(在选择适当胰酶浓度时，对于不同代数的不同细胞系需进行一定的调整，如：部分贴壁牢固的细胞应将胰酶分装后，进行预热处理;细胞密度过高时，应该向胰酶中加入少量缓冲液，缓慢均匀地消化细胞等。对于贴壁格外牢固的细胞，可以尝试多次分批进行消化，最大限度保证细胞状态)。

　　在消化过程中，需均匀慢速晃动培养器皿，以免局部胰酶浓度过高而影响传代。切勿用力摇动，导致边缘松动的大片细胞直接脱落，从而增加细胞成团几率。培养器皿的选择也需注意，部分实验室会使用玻璃培养瓶，因细胞贴壁在玻璃底更容易分离。同时玻璃材质的亲水性和塑料有区别，而且玻璃细胞培养瓶都是实验室内部处理，可能会有清洁残留，在一定程度上抑制细胞的贴壁生长，并且更容易消化，细胞之间的连接比贴壁还要紧密，聚团几率很大。

　　另外，避免传代过程中汇合度较大，本身1:3甚至1:4都可以正常培养的细胞被1:2传代，会导致母代细胞浓度过高，在分化过程中出现堆叠现象

　　适当的处理和设备使用，也可以减少成团。如果使用离心机分离或混合样品，将其设置为正确的速度可以减少聚团，通常情况下，较快的速度可以离心散细胞，但在高速下也必须考虑细胞的脆弱性。

　　细胞抱团了，要如何处理？

　　1. 如果细胞抱团不影响生长就没问题，只是计数时较麻烦。在消化时，可在细胞由多角形变成圆型之前，用手轻磕培养瓶的侧壁，使细胞从壁上脱落（最好不要吹打，对细胞形状和生长都不好）。

　　2. 如果感觉有死细胞的DNA，在细胞悬液中加入几滴无菌的DNAse（1mg/ml溶于水）将DNA链打断。轻柔地吹打细胞，防止对细胞膜造成物理损伤。

　　3. 如果细胞抱团是肉眼可见的，可让细胞静置半分钟左右，然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见，目前还没有特别好的分离方法，只能等细胞状态改善后将这部分细胞慢慢排除出去。

　　总结

　　引起细胞抱团的根本原因是细胞状态变差，且在吹打细胞的时候，那些状态好的细胞也会因为多次吹打而受损，所以我们认为最根本的解决方法是摸透培养的细胞的生长习性，让细胞保持较好的生长状态。