肿瘤恶性化表型研究,最常见的三大金标实验分别是细胞迁移,细胞侵袭,细胞增殖。不知道大家对这三个实验了解多少呢?今天为大家简单介绍一下三个实验的相关信息。
1.细胞划痕
细胞运动性的研究,尤其是在肿瘤细胞的侵袭转移中应用很广泛。肿瘤转移是恶性肿瘤生物学特征之一,因为肿瘤细胞具有较强的运动能力,能够侵入到邻近组织及再穿过血管壁进入血液循环等,因而细胞运动性的研究在弄清肿瘤细胞侵袭和转移的机制上有重要的意义。我们在前几期的内容中已经详细介绍了细胞划痕的意义和相关注意事项,需要进一步了解的小伙伴可以翻看往期资料喔~
2.Transwell侵袭实验
利用一层膜(一般是聚碳酸酯膜)将上下层培养液隔开,细胞放在低营养的培养液里。由于聚碳酸酯膜有通透性,高营养培养液中的成分可以影响细胞,为了寻找营养,细胞会往高营养的培养液里面迁移。这个实验主要是为了模拟细胞分泌金属蛋白酶消化细胞外基质,转移至其他组织的过程。当然,只有具有侵袭能力的细胞才能顺利进行这个实验,因此实验之前最好先进行明胶酶谱法检测MMPs 的表达验证其是否适合进行侵袭实验。
3.CCK8增殖实验
CCK-8 ,是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的应用于细胞增殖和细胞毒性的快速检测试剂盒。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。(相信大家对CCK-8并不陌生的~)
1. 选择合适直径和孔径;
2. 选择合适的培养细胞时间;
3. 细胞要均匀种板;
4. 侵袭实验上下层避免气泡生成;
5. 基质胶易凝固,因此所需枪头和离心管应提前预冷。