细胞转染是将外来核酸RNA或DNA 等小分子物质转移到健康细胞中以产生“转基因细胞”的过程。 在转染过程中，外源核酸链进入健康细胞后，核酸与细胞中现有的 DNA 结合，形成一个转基因细胞。细胞转染过程中如何提高转染效率，转染效率的影响因素有哪些。

　　细胞转染的主要方法是什么？

　　细胞转染主要分为两大类，即：稳定转染和瞬时转染。

　　稳定转染是将外源核酸绕过细胞膜，进入细胞，并通过核膜传递从而使外源核酸与宿主 DNA（或 RNA）整合以产生修饰基因。这种转染方式所培育的细胞后代都将整合这种修饰基因，主要应用领域为：药物筛选、研究形态变化、抗生素耐药性等。

　　瞬时转染是将外源核酸绕过细胞膜进入细胞，并且（如果是 DNA）通过核膜传递。与稳定转染的区别是：外源 DNA 不会整合到宿主 DNA 中，而是通过蛋白质生产继续表达自己。

　　瞬时转染方式的主要特点是：外源 DNA 不会传递给未来的细胞后代，所以环境因素改改变或细胞分裂产生都将终止表达。瞬时转染有助于了解基因沉默、抑制性 RNA 和小规模蛋白质生产。

　　至于，实验中选择哪种转染方法，其实主要取决于两个因素：你的研究方向和正在使用的细胞区别。

　　细胞转染过程：

　　细胞转染按细胞转染过程的不同可以分为以下几种：

　　生物转染：通常被称为转导，方法是通过病毒感染方式将 DNA 整合到宿主细胞核中进行复制。也是医学研究的常用方法。

　　化学 转染：化学转染法是通过阳离子聚合物和脂质体将核酸链带入细胞。通过使细胞带负电和聚合物带正电，这两者被吸引，最终核酸沉积在细胞中的细胞转染方法。

　　物理转染：物理转染法是基于电流、激光的转染方法。比如：通过电转仪实现转染或者通过光转染的方式，使激光束会在特定的亚细胞位置产生孔洞，来传递外源核酸。

　　决定细胞转染效率的因素有哪些？

　　决定细胞转染效率主要的几个因素：

　　1. 细胞群的生长态势与细胞活力：-在创建细胞分析的过程中，细胞活力往往具有决定性的作用。如果没有健康的细胞群，那么转染效率也相对低下，甚至还会得到不正确和误导性的结果。

　　2.细胞融合度：细胞的融合度衡量细胞在给定表面上的堆积程度（不要与细胞密度混淆）。50% 的细胞汇合意味着一半的表面被覆盖。融合过少或过多都会影响细胞对转染的接受程度。

　　3.细胞类型：不同类型的细胞具有不同的寿命、细胞壁特征及功能。比如部分细胞容易进行转染，而有些细胞则本身就难以转染，所以转染效率也会存在差异。

　　4.转染的核酸类型：不同核酸的复杂程度也不相同。比如：DNA的结构 比 RNA 复杂，而 RNA 比某些单独的核酸链更复杂。一般来说，核酸复杂的，转染过程相对困难，转染效率相应也较低。

　　5.转染方法：使用不同的转染方法，所获得的细胞转染效率也是不一样的。

　　如何提高转染效率？

　　在不同的转染过程（生物、化学、物理）中，随着技术和工艺不断改进，转染效率也在不断提升。例如，光学技术和激光精度的每一次进步都会对光转染产生有利的影响。

　　但在此之前，提高细胞转染效率的方法主要有：

　　1. 培养健康的活力指数高的健康细胞群。细胞分选仪可以降低细胞分选时高电压对细胞的刺激，是辅助培养健康细胞群的重要工具。

　　2. 优化核酸，保证有效的核酸纯度。 细胞转染过程中需要确保所引入细胞的 DNA 和 RNA 尽可能接近同质。否则，分析结果时变量太多，转染效率会因不同类型的基因进入细胞而变得混乱。转染前，可以制备不同浓度核酸来用于细胞检测的测试。例如，通过逐步制备 25-250 ng 的核酸浓度以针对实验的细胞群进行测试，从而筛选出合适的转染浓度从而提升转染效率。

　　3.实时校正每个孔的细胞群，使每个孔内的细胞群尽量保持适宜的密度。

　　当细胞大量聚集在一个孔中时，由于细胞接触面会受到抑制，容易造成低转染率。正常情况下，细胞的汇合度在大约 60-80%之间，转染效率较高。