想法搞份免疫组化文章，但是不会免疫组化怎么办？今天就先为大家介绍免疫组化步骤（石蜡切片）。
实验步骤：
1. 在60℃烤箱烤片30-60min，这一步是为了使蜡片水分蒸发和石蜡融化，好让组织切片牢固贴在玻片上。做切片是免疫组化的前提，当然要注意薄厚均匀、切片完整、无褶无刀痕等，这些比较考验刀工；
2. 脱蜡水化，依此放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各10min，乙醇梯度（高至低）各2min，水。然后用自来水洗一下，但不要直接对着切片冲洗；
3. 抗原修复，这个我一般选高压热修复，ph6.0柠檬酸缓冲液，一定要全部浸泡切片，等高压锅冒气后5min结束，自然冷却，温度骤降可能引起脱片哦。3%H2O2避光浸泡15min；
4. 使用免疫组化油笔围绕组织画圈，然后PBS洗5min×3次，这个时候就会发现PBS被锁在画的圈中，不会流干，保证不会干片；
5. 滴加5%BSA（BSA用PBS溶）稀释的一抗，每个组织约20μl，用200μl的枪头尖端抹平，4℃过夜或者37℃1-2h；
6. 滴加二抗，一滴每个，用200μl的枪头抹平，室温静止30min；
7. 再次PBS洗5min×3次；
8. DAB-H2O2显色10min。（B:C=1:50，25μl每个，现配现用）在这时要观察，如果染色明显，不到10min即可蒸馏水洗终止显色，但是一般超过20min都不会有什么好结果；
9. Mayer苏木素染色30s，水洗，盐酸酒精分化3s，流水浸15min；
10. 脱水，乙酸2min，乙醇梯度（低至高）各2min，二甲苯5min；
11. 中性树胶封片。
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