影响细胞转染实验转染因素有哪些

2023-03-27 10:37:34

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　　影响细胞转染实验转染因素：

　　1、血清

　　血清影响复合物的形成，降低转染效率

　　阳离子脂质体和 DNA 的*佳量在使用血清时会有所不同，因此想在转染培养基中加入血清时要进行条件优化。大部分细胞可以在无血清培养基中几个小时内保持健康，对于对血清缺乏比较敏感的细胞，可以使用 OPTI-MEM I 培养基。对于对血清缺乏比较敏感的贴壁细胞，建议使用 LIPOFECTAMINE 2000。

　　2、抗生su

　　比如青霉素和链霉素，是影响转染的培养基添加物。这些抗生su一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生su可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率低。

　　3、细胞代数

　　转染前细胞*好经过 1-2 次传代保证细胞生长旺盛容易转染，注意贴壁细胞一旦长满就不好转染。

　　4、细胞铺板密度

　　一般转染时，贴壁细胞密度为 70%-90%，悬浮细胞密度为 2*10^6--4*10^6 细胞/ml 时效果较好。确保转染时细胞没有长满或处于静止期。铺板细胞数目的增加可以增加转染活性和细胞产量。

　　5、DNA 质量

　　DNA 质量对转染效率影响非常大。一般的转染技术基于电荷吸引原理，如果 DNA 不纯，如带少量的盐离子，蛋白，代谢物污染都会显着影响转染复合物的有效形成和转染的进行。

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