细胞周期技术总结与分享

2023-03-30 10:39:18

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　　细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期：即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期，停止细胞分裂，执行一定生物学功能（G0期）。由于细胞周期各时相的DNA含量不同，通常正常细胞的G1/ G0期具有二倍体细胞的DNA含量（2N），而G2/ M期具有四倍体细胞的DNA含量（4N）,而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。

　　技术原理

　　PI可以与DNA结合，其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此，通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时，可以将细胞周期各时相区分为G1/G0期，S期和G2/M期。

　　实验方法

　　Step1:细胞培养

　　Step2:转染或药物处理

　　Step3:细胞收集

　　Step4:加周期试剂

　　Step5:上机检测

　　在施加药物后，细胞周期明显阻滞。

　　技术总结

　　细胞铺板时密度宜适中，视细胞贴壁与否，选择胰酶消化或直接吸取培养基。初次离心后，需倒去上清，加入生理盐水再次离心收取沉淀。以快速周期检测试剂盒为例，在加入周期试剂前需完全吸去EP管内上清，并且在1h内上机检测。

　　在以上所有的操作步骤中，动作均需轻柔，避免反复吹打，形成机械损伤，而出现细胞碎片过多。同时，在细胞接种时，一定要控制所有组的细胞密度，因为细胞密度会对细胞周期状态有所影响，而导致细胞周期分布不一样。