细胞增殖/毒性/活力检测方法按照原理通常可以分为以下几类：细胞荧光标记检测、DNA合成检测、ATP水平测定、代谢活性检测、膜损伤检测。那每一类又具体包括了哪些方法呢？赶紧结合图文快速一览吧！

 一、细胞荧光标记检测

 原理概要：利用无毒性作用的荧光标记物对细胞膜、细胞质等细胞特定结构进行标记，然后通过对增殖细胞群体荧光强度的测定反映细胞的增殖情况。

 （1）CFSE染色法

优点：持续时间长，稳定性强，具有良好的示踪作用，可以追踪细胞在体内的分裂增殖过程，并且对细胞生理活动没有任何影响。

缺点：①浓度太低，细胞标记的荧光强度不够，太高了对细胞有毒性，且影响细胞增殖；②标记孵育时要经常摇匀。

应用场景：用于检测细胞增殖，细胞周期的估算及细胞分裂等方面。 

（2）PKH26染色法

优点：持久的荧光信号、高亮度和稳定性、不影响细胞生理功能、高灵敏度和特异性、快速高效。

缺点：暂无

应用场景：细胞增殖分析、细胞迁移分化跟踪和细胞间相互作用。

二、DNA合成检测

原理概要：通过测定细胞的DNA合成含量来评价细胞的增殖能力，是目前实验室中检测细胞增殖最准确的方法，如BrdU/EdU检测法，常应用于细胞DNA修复、分化及细胞标记物追踪等方面。

（1）BrdU法

 优点：简单、快速、安全、敏感性好；在体内和体外均可用于标记。

缺点：①BrdU是光敏型，见光易分解，掺入BrdU的细胞也容易见光淬灭因此都需要避光处理：②BrdU不稳定，即使在4℃也不稳定，尽量现配现用；③BrdU与抗体结合需要DNA的变性，并进行预处理，一般是使用DNA酶或酸处理细胞，这就破坏了DNA原有的结构。

应用场景：检测细胞增殖、细胞周期以及细胞凋亡等。

（2）EdU法

优点：①EdU只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内更容易扩散；②无需DNA变性（酸解、热解、酶解等）即可有效检测，可有效避免样品损伤；③操作简单，反应快速，结果准确。

缺点：较代谢活性检测和ATP水平测定方法来说，步骤较多，不适合高通量筛选。

应用场景：直观检测细胞增殖情况，单细胞水平检测细胞分裂增殖情况，还可应用于细胞DNA修复、分化及细胞标记物追踪等方面。

（3）3H-TdR渗入法

优点：敏感性高、客观性强、重复性好，具有良好的示踪作用，是一种快速、简便的方法。

缺点：设备较贵（液体闪烁计数器），同时还存在放射性核素污染问题。

应用场景：用于检测细胞DNA的代谢及细胞增殖情况。

三、ATP水平测定

原理概要：通常以荧光素-荧光素酶生物发光的ATP检测法来测定细胞增殖情况。因为活细胞需要不断以ATP的形式输入自由能，所以通过检测ATP的增加水平可以反映出细胞增殖情况。

（1）CTG

优点：①简单CTG和细胞培养中的常用培养基兼容，如RPMI1640、MEM、DMEM、Ham'sF12等，不受酚红和有机溶剂的影响；②线性范围宽、发光强度高、检测灵敏度高、稳定性好；③操作简单，读数稳定，检测速度快。

缺点：价格昂贵，成本太高。

应用场景：生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。

（2）ATP生物发光法

优点：可以将细胞计数时间缩短至几分钟，十分快速、操作简便、灵敏度高。

缺点：易受到微生物数量、非微生物ATP、ATP提取剂、pH、温度、色素等诸多干扰因素的影响。

应用场景：广泛应用于体外药物筛选。

四、代谢活性检测

原理概要：基于细胞内琥珀酸脱氢酶活性，将无色的底物转化为有色产物，例如将四氮唑盐（如MTT、XTT、WST-1、WST-8等）还原为有色的甲瓒（Formazan），通过测定产物的量来评估细胞的活性和增殖能力。

（1）CCK-8法

优点：①CCK8试剂使用更为方便，无需洗涤细胞；②重复性更好，MTT实验生成的甲瓒不是水溶性的，需要使用DMSO等有机溶剂溶解，而CCK-8法产生的甲瓒是水溶性的，反应完成后可以直接用于检测：③CCK-8对细胞的毒性小，可以保持细胞原状态。

缺点：①CCK-8试剂价格略高；②CCK-8试剂的颜色为淡红色，与含酚红的培养基颜色接近，不注意的话容易产生漏加或多加。

应用场景：药物筛选、肿瘤药敏试验、生物活性因子的活性检测、细胞增殖测定等。

（2）MTT法

优点：价格低廉、灵敏且无放射性。

缺点：①MTT溶液需4℃避光保存，现用现配；②反应产生的甲瓒结晶不溶于水，无法直接测定吸光度，需要被DMSO溶解之后才能检测；③MTT通常适用于贴壁细胞的检测，不适合悬浮细胞的检测；④对细胞毒性高，反应后细胞形态会完全消失。

应用场景：药物筛选、肿瘤药敏试验、生物活性因子的活性检测、细胞增殖测定等。

（3）XTT法

优点：使用方便，省去了洗涤细胞；检测快速；灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；重复性优于MTT

缺点：XTT水溶液不稳定，需要低温保存或现配现用。

应用场景：药物筛选、肿瘤药敏试验、生物活性因子的活性检测、细胞增殖测定等。

 （3）WST-1法

优点：①操作简便，且具有较高的敏感性和特异性，能够快速准确地测量细胞增殖；②由于其持久性，可以应用于细胞增殖动力学的跟踪；③适用于高通量筛选系统中的高效药物筛选。

缺点：暂无

应用场景：药物筛选、肿瘤药敏试验、生物活性因子的活性检测、细胞增殖测定等。

五、膜损伤检测

原理概要：通过计算染料摄取比例，可以出反应细胞的增殖或毒性情况。根据活/死细胞膜完整性的不同，以及进入细胞内染料情况的不同，检测细胞活率。

（1）Calcein AM/PI法

优点：①操作简便，方法可靠；②可直接进行单细胞观察，较为直观；③可以用荧光酶标仪或流式细胞仪进行定量，得到活/死细胞比率；③与其它同类试剂（如BCECF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate）相比，Calcein-AM的细胞毒性很低，更适合于活细胞的检测。

缺点：只反映活/死细胞情况，不能体现增殖代谢水平，不适合高通量筛选。

应用场景：计算细胞活率，进行活细胞和死细胞水平的分析，也可用于一些生物相容性评价。

（2）LDH法

优点：染料水溶性好、细胞毒性弱、操作简单、检测时间短等优点，适合快速、高通量检测。

缺点：血清浓度高时会有干扰，灵敏度比放射性同位素51Cr低。

应用场景：常用于测定死亡细胞和受损细胞的数量。

（3）台盼蓝染色法

优点：方便实用、价格低廉、操作简单。

缺点：①对细胞有毒害作用，会致死有损伤的细胞，导致细胞活性检测结果有所偏差；②细胞碎片多、杂质多等情况下，无法进行准确计数。

应用场景：常用于检测细胞膜的完整性，检测细胞是否存活。