今天给大家讲一讲适应性免疫系统中的T细胞。那么什么是T细胞？怎样才能将T细胞相关知识运用到自己的研究中？

一、T细胞的分类

T细胞一般分为三大类：

杀伤性T细胞：通过与特异性的靶细胞接触并启动靶细胞“自杀程序”，摧毁病毒感染的细胞。

辅助性T细胞：通过分泌对其它免疫系统细胞有强大作用的化学信使，指挥免疫应答过程。

调节性T细胞：防止免疫系统反应过度，但具体机制还有待研究。

二、案例分析

近两年来免疫在肿瘤中的研究一直高热不下，那么我们今天通过这篇7.5分的文章，一起跟随作者的研究思路，学习如何将理论与实践相结合。

在过去几十年中，大多数与转移相关的研究都集中在遗传诱导的癌细胞转化，但近来发现免疫能抑制肿瘤微环境，特别是对乳腺癌转移有显著作用。

肿瘤免疫微环境中免疫细胞分为两大类：先天免疫细胞和适应性免疫细胞。它们通过复杂的通信网络分泌细胞因子、趋化因子、生长因子和细胞外基质（ECM）的蛋白质等，与肿瘤细胞相互作用调节，共同组成庞大复杂的免疫微环境。

01 ADQ抑制乳腺癌的肺转移和免疫抑制TME

首先，作者建立乳腺癌模型并进行实验，以口服方式给药。结果显示，癌毒清能够降低肿瘤的体积和质量，但不影响小鼠体重。进一步的体内成像实验发现小鼠肺的位置出现肿瘤，即出现肺转移

接着作者进行HE染色、流式细胞术分析，结果显示，肿瘤浸润性淋巴细胞的浸润水平随癌毒清浓度的增加而增加，CD8和毒性T细胞的占比也随癌毒清浓度的增加而增加，幼稚CD4、T细胞和Treg细胞占比下降。

A-C：ADQ治疗浓度依赖性降低肿瘤体积和质量，但对体重没有显著影响

D：ADQ浓度依赖性降低肿瘤肺转移

E：ADQ浓度依赖性增加肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）的浸润水平

F：ADQ浓度依赖性增加CD8及T细胞、降低CD4和T细胞及Treg细胞

02 ADQ降低TAMs的M2表型极化和CXCL1分泌

作者通过流式细胞术发现癌毒清体内治疗能降低M2巨噬细胞极化。随后进行免疫荧光检测，结果发现癌毒清能降低CXCL1阳性巨噬细胞表达水平。

作者通过体外实验检测癌毒清的作用。结果表明CCK-8活力浓度依赖性下降，M2极化降低，CXCL1表达和分泌均受限制。

A：ADQ体内治疗浓度依赖性降低M2巨噬细胞极化

B：ADQ体内治疗浓度依赖性降低CXCL1阳性巨噬细胞

C：体外诱导巨噬细胞（Raw264.7）的分化

D：体外诱导M2极化巨噬细胞的活性检测

E：ADQ体外浓度依赖性降低M2极化

F-J：ADQ体外浓度依赖性降低CXCL1的表达和分泌

03 TAM/CXCL1信号传导促进Tregs的分化和免疫抑制

作者用shRNA敲除CXCL1，成功获得CXCL1敲除的肿瘤相关巨噬细胞（TAM），然后用CXCL1或CXCL1敲除的TAM培养基处理T细胞，确定TAM分泌的CXCL1能诱导CD4和T细胞的趋化性功能，增加Treg分化及降低CD8和T细胞的毒性。

A：诱导生成TAM或shCXCL1细胞

B：流式细胞术分析幼稚CD4和T细胞

C：CXCL1增强CD4和T细胞活力，敲减CXCL1的TAM降低幼稚CD4和T细胞活力

D：CXCL1增强Treg分化，敲减CXCL1的TAM降低Treg分化

E：CXCL1诱导CD4和T细胞趋化性功能，敲减CXCL1的TAM降低趋化性功能

F：Treg和CD8和T细胞分选

G：CXCL1降低CD8和T细胞增殖，敲除CXCL1的TAM增加细胞毒性

H：CXCL1降低CD8和T细胞毒性，敲除CXCL1的TAM增加细胞毒性

04 CXCL1招募外周幼稚CD4+T细胞，并通过NF-κB/FOXP3途径诱导分化Treg

为了研究CXCL1是如何引起Treg分化，作者首先定位Treg位置，发现其分布在离血管较远的地方。随后检测CXCL1受体在幼稚和非幼稚CD4及T细胞中的表达情况，发现幼稚细胞中表达显著高于非幼稚细胞。

紧接着，作者进行WB和免疫荧光检测，结果发现CXCR2抑制能够逆转CXCL1诱导的Treg分化。

A：CD62L幼稚T细胞主要位于乳腺肿瘤组织内的血管周围，Treg分布在离血管相对较远的地方

B：幼稚CD4和T细胞表达CXCR2显著高于非幼稚CD4和T细胞

C：CXCL1诱导CD4和T细胞的趋向性功能，CXCR2抑制剂阻止这一作用

D-G：CXCL1诱导FOXP3表达，CXCR2抑制剂阻止这一作用

H-I：CXCL1诱导p65的核异位，CXCR2抑制剂阻止这一作用

G-I：qRT-PCR和Western blot检测内质网应激相关外泌体孵育的巨噬细胞中PD-L1的表达升高

J：CXCL1促进p65在FOXP3的启动子区域结合

05 ADQ体外抑制TAM/CXCL1诱导的Treg分化和免疫抑制功能
随后作者用CCK-8测定癌毒清对幼稚CD4及T细胞活力的影响，通过流式细胞术、WB和免疫荧光检测，发现癌毒清确实能缓解TAM对CD8及T细胞活力、毒性的抑制作用。

A：ADQ浓度依赖性降低幼稚CD4和T细胞活力

B-D：ADQ逆转TAM诱导的Treg分化

E：ADQ逆转TAM降低的CD8和T细胞活力

H-I：ADQ逆转TAM降低的CD8和T细胞毒性

06 ADQ通过抑制TAM/CXCL1/Treg途径抑制乳腺癌免疫逃逸和肺转移

最后作者进行体内验证。结果表明TAM能够诱导肿瘤生长，癌毒清能够逆转TAM作用。

A-C：ADQ缓解TAM诱导的肿瘤生长

D：ADQ逆转TAM诱导的肿瘤肺转移

E：ADQ逆转TAM抑制的TIL浸润

F：ADQ逆转TAM抑制的肿瘤细胞凋亡

G：ADQ逆转TAM诱导的幼稚CD4和T细胞占比、Treg分化和M2巨噬细胞分化

三、相关知识

T细胞活化过程中主要有三个信号，三个信号分别对应三种刺激方式：

01 信号1：

T细胞上的抗原特异性T细胞受体（TCR/CD3）与抗原提呈细胞（APC）上的抗原肽-MHC分子复合物的相互作用。

刺激方式：常用CD3抗体，与T细胞表面的TCR/CD3结合后，触发胞内ITAM信号，通过Lck/ZAP-70转导，激活TCR/CD3下游的信号通路。02
02 信号2：

由APC上的协同刺激分子与T细胞表面的相应受体分子之间的相互作用提供协同刺激信号。
刺激方式：常用CD28抗体，与T细胞表面CD28结合后，促进T细胞的增殖活化。

03 信号3：

细胞分泌细胞因子，促进T细胞克隆扩增。

刺激方式：常用IL-2，与T细胞表面的IL-2受体特异性结合，促进T细胞活化与增殖。