免疫荧光染色结果怎么看？1分钟速解！

免疫荧光染色等各种实验，生物医学人都知道是必须得会的基础实验！但它的结果图要怎么看呢？今天一起来解读吧～

一、定义&用途

定义：免疫荧光图（免疫荧光染色结果图）是利用荧光标记抗体或抗原作为探针，与组织或细胞内特定抗原或抗体结合后，在荧光显微镜下观察得到的图像。通过这种方式，可以确定抗原或抗体的位置和分布。

用途：

蛋白质定位：荧光标记抗体可定位细胞或组织中的特定蛋白质，有助于理解蛋白质功能、细胞器结构和信号传导途径。

细胞生物学研究：用于细胞生物学研究，观察分析细胞内结构，包括细胞骨架、细胞器如线粒体、内质网、高尔基体，及细胞膜上的蛋白质。

疾病诊断：在临床诊断中用于检测病原体抗原或抗体，助于快速诊断疾病。它也用于检测肿瘤标志物和自身免疫性疾病的抗体。

细胞分选和纯化：免疫荧光技术可用于标记特定细胞，便于通过流式细胞术等方法分选和纯化，为细胞培养和功能研究提供高质量样本。

二、案例解读

结果解读：使用TAM标记物Iba1进行免疫荧光染色表明，敲低WISP1可显著降低胶质瘤干细胞（GSC）来源的异种移植物中的TAM密度。

三、相关疑问与解答

1）为什么好多免疫荧光染色实验都要染DAPI?

DAPI染料能透过活细胞膜，但不能进入死细胞，因此可用于区分活死细胞，提升实验精确度。

它还能与免疫荧光技术结合，用于标记细胞核，帮助识别特定蛋白质或生物分子。

2）Merge是什么?

免疫英光中的Merge技术用于细胞和组织中染色体、蛋白质、细胞器等的可视化，通过合并使用不同荧光探针标记的分子图像来形成一张综合图像。

3）右边的统计柱状图是怎么做的?

使用ImageJ进行制作。

在统计免疫荧光时，我们关注的是图像中每个细胞的平均荧光强度。由于图像中细胞数量不一，不能仅以单张图片的荧光强度为准，而应测定所有细胞的平均荧光强度。

下面是具体操作步骤：

Step1-图像选择：打开lmageJ-File-Open-选择目标图像（结果展示包括目标蛋白、DAPI和Merge图像，统计时应使用含有目标蛋白的免疫荧光图像）

Step2-灰度转换：lmage-Type-8bit（对图像进行灰度转换，一般转换成8bit）

Step3-阈值设定：lmage-Adjust-Threshold…-调整荧光Threshold确定细胞荧光区域（因为图片中并非所有区域都有细胞，因此需设定阈值以确保红色的区域大小与实际绿色荧光图像相匹配，且不同组别的荧光图片也需采用统一的阈值）

Step4-调整参数：Analyze-SetMeasurements…-勾选以下选项-OK-得出定量结果（Mean）

Area

Mean gray value

Min&ma x gray value

Integrated density

Limit to threshold