蛋白酶抑制剂从广义上指与蛋白酶分子活性中心上的一些基团结合，使蛋白酶活力下降，甚至消失，但不使酶蛋白变性的物质。但是不同的蛋白酶抑制剂，其功能和效用也是不同的。

一、蛋白酶抑制剂的主要作用

蛋白酶抑制剂的主要作用是通过干扰蛋白质的降解过程来达到抑制特定蛋白酶活性的目的。

具体来说，它的作用包括：

抑制肿瘤的生长：许多肿瘤细胞依赖于蛋白酶来降解细胞外基质和基底膜，以促进其侵袭和转移。蛋白酶抑制剂可以阻止这一过程，抑制肿瘤的生长和扩散。

抗病毒治疗：蛋白酶抑制剂用于抗HIV治疗中，可以阻止HIV病毒的复制过程，因为HIV病毒需要蛋白酶来将自身遗传物质组装成成熟的病毒颗粒。

治疗多种疾病：蛋白酶抑制剂还在治疗胃肠道疾病、癌症、风湿性关节炎等多种疾病中发挥重要作用，通过抑制相应蛋白酶的活性来减轻症状或延缓疾病进展。

二、哪些实验会用到蛋白酶抑制剂？

①蛋白质提取实验：在提取细胞或组织中的蛋白质时，细胞破碎过程中会释放出蛋白酶，这些蛋白酶可能会降解目标蛋白质。因此，在提取过程中加入蛋白酶抑制剂，如PMSF（苯甲基磺酰氟）、leupeptin（亮抑酶肽）等，可以抑制蛋白酶的活性，保护蛋白质不被降解。

②酶活性测定实验：在研究蛋白酶的活性或功能时，为了避免其他蛋白酶的干扰可能需要使用蛋白酶抑制剂来抑制非目标蛋白酶的活性。这样可以确保实验结果的准确性和可靠性。

③细胞培养实验：在进行细胞培养时，细胞可能会分泌蛋白酶，这些蛋白酶可能会影响细胞的生长、分化或凋亡等过程。因此，在细胞培养液中加入适量的蛋白酶抑制剂，可以抑制这些蛋白酶的活性，从而研究其对细胞行为的影响。

④分子生物学实验：在DNA或RNA的提取、纯化以及后续的分子生物学实验中，蛋白酶抑制剂也常被用作保护剂，以防止蛋白质对核酸的降解或污染。

⑤信号传导研究：蛋白酶在细胞内的信号传导过程中起着重要作用。为了研究特定信号传导途径中蛋白酶的作用，可能需要使用蛋白酶抑制剂来抑制特定蛋白酶的活性，从而观察信号传导的变化。

三、40种常见的蛋白酶抑制剂

1、Amastatin（氨肽酶抑制剂）

有效浓度：1~10uM

工作浓度：1:100倍稀释至终浓度10uM

贮存液配制：1mg/2.1ml溶于无水乙醇（1mM）

稳定性：其水溶液只可保存一天，其1mM的乙醇溶液在-20℃时可保存一个月

抑制蛋酶种类：可抑制丝氨酸蛋白酶等

2、Aprotinins（抑肽酶）

有效浓度：0.6~2ug/ml

工作浓度：1:5000倍稀释至终浓度2ug/ml

贮存液配制：10mg/ml溶于PBS

稳定性：非常稳定，当pH>12.8时失去活性，可溶于水（10mg/ml），-20℃下可长期保存

抑制蛋白酶种类：可抑制纤溶酶、激肽释放酶、胰蛋白酶等

3、Acetyl-Pepstain（乙酰胃泌素）

有效浓度：50~200nM

工作浓度：1:1000倍稀释至终浓度1uM

贮存液配制：1mg/1.553ml溶于50%醋酸（1mM）

稳定性：水溶液中较为稳定，而在有机溶剂中则可能发生降解

抑制蛋白酶种类：可逆的天冬氨酸蛋白酶抑制剂，抑制HIV-1和2蛋白酶

4、AEBSF（丝氨酸蛋白酶抑制剂）

有效浓度：1mM

工作浓度：在1mM或更低浓度下使用

贮存液配制：50mg/2.09ml溶于水（100mM）

稳定性：可溶于水，其pH7的水溶液在4℃时可保持稳定1~2个月，在pH>8的情况下会发生缓慢水解

抑制蛋白酶种类：可抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、纤溶酶、凝血酶及激肽释放酶等

5、Arphamenine A

有效浓度：100~500nM

工作浓度：1:1000倍稀释至终浓度1uM

贮存液配制：1mg/2.48ml溶于水（1mM）

稳定性：可溶于水，贮存液在-20℃时可保存一个月

抑制蛋白酶种类：可抑制丝氨酸蛋白酶，如胰蛋白酶和糜蛋白酶 

6、Arphamenine B

有效浓度：50~100nM

工作浓度：1:1000倍稀释至终浓度1uM

贮存液配制：1mg/2.48ml溶于水（1mM）

稳定性：可溶于水，贮存液在-20℃时可保存一个月

抑制蛋白酶种类：高度特异性的氨基肽酶B抑制剂

7、Antipain 2HCl（抗痛素二盐酸盐）

有效浓度：1~100uM

工作浓度：1:100倍稀释至终浓度100uM

贮存液配制：5mg/8.27ml溶于水（10mM）

稳定性：工作液仅能稳定数小时；贮存液在4℃时可稳定一周，在-20℃时可稳定一个月，还可溶于甲醇或DMSO

抑制蛋白酶种类：可抑制木瓜蛋白酶及胰蛋白酶，对纤溶酶也有一定抑制作用

8、AntithrombinⅢ（抗凝血酶Ⅲ）

有效浓度：与需抑制的蛋白酶等摩尔浓度

工作浓度：与需抑制的蛋白酶等摩尔浓度

贮存液配制：1mg/17.24ml溶于pH8.3的150mM NaCl、100mM柠檬酸钠、10mM Tris-HCl溶液中（1mM）

稳定性：-20℃时，水溶液非常稳定

抑制蛋白酶种类：可抑制凝血酶、FactorXa、胰蛋白酶等

9、Alpha-2-Marcoglobulin

有效浓度：与需抑制的蛋白酶等摩尔浓度

工作浓度：与需抑制的蛋白酶等摩尔浓度

贮存液配制：1mg/13.8ul溶于水（100uM）

稳定性：pH6~7.5的贮存液（水溶液）在-20℃时可保存六个月，对酸性环境敏感

抑制蛋白酶种类：可抑制菠萝蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶、无花果蛋白酶等

10、Bestatin（氨肽酶抑制剂）

有效浓度：1~10uM

工作浓度：1:100倍稀释至终浓度10uM

贮存液配制：2mg/6.48ml溶于甲醇（1mM）

稳定性：工作液可保存一天，1mM的甲醇贮存液在-20℃时可保存至少一个月

抑制蛋白酶种类：可抑制胃蛋白酶、激肽释放酶、荆豆蛋白酶、胰蛋白酶等

11、Chymostatin（组织蛋白酶G抑制剂）

有效浓度：10~100uM

工作浓度：1:100倍稀释至终浓度100uM

贮存液配制：5mg/825ul溶于DMSO（10mM）

稳定性：可以在-20℃下储存长达1个月

抑制蛋白酶种类：可抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶等

12、Cystatin（血清胱抑素C）

有效浓度：与需抑制的蛋白酶等摩尔浓度

工作浓度：与需抑制的蛋白酶等摩尔浓度

贮存液配制：1mg/ml溶于pH7.5的20mMTris缓冲液

稳定性：热稳定性好，冷冻保存于20%的pH7.5的甘油溶液或其他缓冲液

抑制蛋白酶种类：可抑制半胱氨酸蛋白酶，包括二肽酰肽酶I及Ⅲ、木瓜蛋白酶无花果蛋白酶及Cathepsin B

13、Cathepsin Inhibitor Ⅰ

有效浓度：10~100uM

工作浓度：1:50倍稀释至终浓度200uM

贮存液配制：1mg/210ul溶于DMSO或乙醇（10mM）

稳定性：在pH5~9的缓冲液中，30℃时其半衰期为25h，-20℃时其半衰期为两周

抑制蛋白酶种类：可抑制Cathepsin B/L/S及木瓜蛋白酶

14、Cathepsin Inhibitor Ⅱ

有效浓度：10~100uM

工作浓度：1:50倍稀释至终浓度200uM

贮存液配制：1mg/204ul溶于DMSO或乙醇（10mM）

稳定性：在pH5~9的缓冲液中，30℃时其半衰期为27h，0℃时其半衰期为两周

抑制蛋白酶种类：可抑制Cathepsin B/L/S及木瓜蛋白酶

15、Cathepsin Inhibitor Ⅲ

有效浓度：10~100uM

工作浓度：1:50倍稀释至终浓度200uM

贮存液配制：1mg/198ul溶于DMSO或乙醇（10mM）

稳定性：在pH5~9的缓冲液中，30℃时其半衰期为37h，0℃时其半衰期为两周

抑制蛋白酶种类：可抑制Cathepsin B/L/S及木瓜蛋白酶

16、Cathepsin/ Subtilisin Inhibitor

有效浓度：10~100uM

工作浓度：1:100倍稀释至终浓度100uM

贮存液配制：1mg/193ul溶于DMSO或乙醇（10mM）

稳定性：在pH5~9的缓冲液中，30℃时其半衰期为2.5h，0℃时其半衰期为40h

抑制蛋白酶种类：可抑制CathepsinL，枯草杆菌蛋白酶及Thermitase

17、3,4-Dichloroisocoumarin

有效浓度：5~100uM

工作浓度：1:100倍稀释至终浓度100uM

贮存液配制：10mg/4.65ml溶于DMSO（10mM）

稳定性：工作液在pH7.5时半衰期为20分钟，10mM的DMF或DMSO贮存液在-20℃时可保存几个月

抑制蛋白酶种类：可抑制多种丝氨酸蛋白酶，对B-内酰胺酶无抑制作用

18、Dipeptidylpeptidase Ⅳ Inhibitor Ⅰ

有效浓度：10~100uM

工作浓度：1:100倍稀释至终浓度100uM

贮存液配制：1mg/219.5ul溶于DMSO（10mM）

稳定性：其DMSO贮存液在20℃时可保存六个月，其水溶液可稳定一天

抑制蛋白酶种类：丝氨酸/脯氨酸特异性蛋白酶，可抑制二肽酰肽酶IV

19、Dipeptidylpeptidase Ⅳ Inhibitor Ⅱ

有效浓度：1~10uM

工作浓度：1:100倍稀释至终浓度10uM

贮存液配制：1mg/2.81ml溶于DMSO或乙醇（1mM）

稳定性：其工作液在pH7.6、30℃时，半衰期为24h

抑制蛋白酶种类：可抑制二肽酰肽酶Ⅱ、Ⅳ

20、EDTA-4Na

有效浓度：1~10mM

工作浓度：1:50倍稀释至终浓度10mM

贮存液配制：1.9g/10ml溶于水（0.5M）

稳定性：其水溶液很稳定，其贮存液（pH8.5的0.5M水溶液）在4℃时可保存数月

抑制蛋白酶种类：可抑制金属蛋白酶，如羧肽酶A、基质金属蛋白酶（MMPS）等

21、E-64 Protease Inhibito

有效浓度：1~10uM

工作浓度：1:100倍稀释至终浓度10uM

贮存液配制：5mg/13.99ml溶于水（1mM）.

稳定性：工作液在正常pH值下可稳定数天，1mM的水溶液在-20℃时可保存数月

抑制蛋白酶种类：抑制半胱氨酸酸蛋白酶而不会影响其他酶的半胱氨酸残基，与小分子量的巯基醇如β-巯基乙醇不会产生反应，具有高度特异性

22、EST（E-64d）

有效浓度：20~50ug/ml

工作浓度：每毫升培养基加20~50ul

贮存液配制：1mg/ml溶于乙醇

稳定性：贮存液在-20℃时可保存六个月

抑制蛋白酶种类：可抑制多种丝氨酸蛋白酶，包括凝血酶、胰蛋白酶、尿激酶等

23、Ecotin

有效浓度：0.5~1.5nM

工作浓度：取决于具体应用和研究，需参考具体文献或实验指南

贮存液配制：所提供溶液为1mM的HCI溶液

稳定性：贮存液保存于-70℃，避免反复冻融

抑制蛋白酶种类：可抑制多种丝氨酸蛋白酶，包括糜蛋白酶、Factor Xa及XIIa等

24、Elastinal

有效浓度：10~100uM

工作浓度：1:100倍稀释至终浓度100uM

贮存液配制：5mg/975ul溶于水（10mM）

稳定性：工作液可稳定数小时，贮存液在4℃时可保存一周，在-20℃时可保存数月

抑制蛋白酶种类：可抑制弹性蛋白酶及弹性蛋白酶样丝氨酸蛋白酶

25、Ebelactone B

有效浓度：0.1~2mg/ml.

工作浓度：2.84或5.08ul/ml

贮存液配制：1mg/2.84ml（1mM）

稳定性：可溶于甲醇（200mg/ml）、乙醇及氯仿；溶液在4℃时可保存一周，在-20℃时可保存一个月

抑制蛋白酶种类：可抑制特异性的羧肽酶Y样外肽酶

26、Leupeptin（亮抑酶肽）

有效浓度：10~100uM

工作浓度：1:100倍稀释至终浓度100uM

贮存液配制：5mg/1.054ml溶于水（10mM）

稳定性：工作液可稳定数小时，贮存液在4℃时可稳定一周，-20℃时可稳定一个月

抑制蛋白酶种类：可抑制胰蛋白酶样蛋白酶及一些半胱氨酸蛋白酶，如凝血酶等（氨基肽酶-M抑制剂）

27、Leuhistin

有效浓度：1~2ug/ml

工作浓度：1~2ul/ml

贮存液配制：1mg/ml溶于水

稳定性：可溶于水、乙醇及DMSO，贮存液应保存在-20℃环境下

抑制蛋白酶种类：可抑制抑制胰蛋白酶、弹性蛋白酶、组织蛋白酶B和C

28、NCO-700

有效浓度：0.5~100mM

工作浓度：1:100倍稀释至终浓度100uM

贮存液配制：1mg/87.6ml溶于PBS、水或乙醇（10mM）

稳定性：常温下其水溶液稳定期为6h，其乙醇溶液的稳定性略高

抑制蛋白酶种类：可抑制钙激活中性蛋白酶、Cathepsin B/L及木瓜蛋白酶

29、PMSF

有效浓度：0.1~1mM

工作浓度：1:200倍稀释至终浓度1uM

贮存液配制：100mg/2.87ml溶于甲醇或乙醇（200mM）

稳定性：在pH7.5时半衰期为1h，贮存液在4℃时可保存9个月以上

抑制蛋白酶种类：可抑制羧肽酶Y、糜蛋白酶、FactorXa、木瓜蛋白酶、纤溶酶等

30、Pepstatin A（抑肽素）

有效浓度：1uM

工作浓度：1:1000倍稀释至终浓度1uM

贮存液配制：5mg/7.29ml（1mM）

抑制蛋白酶种类：可抑制胃蛋白酶、Cathepain B&L、血管紧张肽原酶等

稳定性：以1mg/ml溶于甲醇，搅拌过夜可以1mg/ml溶于乙醇，333mg/ml溶于6N的乙酸，4℃下可保存一周

31、p-APMSF

有效浓度：10~100uM

工作浓度：1:500倍稀释至终浓度100uM

贮存液配制：5mg/346ul溶于水（50mM）

稳定性：工作液在pH7.0的缓冲体系中其半衰期为6mins；其50mM的水溶液可在-20℃时长期存放

抑制蛋白酶种类：可抑制胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶，对乙酸胆碱酯酶无影响

32、Phosphoramidon（膦酰二肽钠）

有效浓度：1~10uM

工作浓度：1:200倍稀释至终浓度8.5uM

贮存液配制：1mg/1.015ml（1.7mM）

稳定性：贮存液（1mg/ml水溶液）在-20℃时至少可保存一个月

抑制蛋白酶种类：可抑制一些金属内肽酶，是嗜热菌蛋白酶的高特异性抑制剂

33、Subtilisin Inhibitor Ⅰ

有效浓度：10~100uM

工作浓度：1:100倍稀释至终浓度100uM

贮存液配制：1mg/264ul溶于DMSO或乙醇（10mM）.

稳定性：其pH5~9的工作液在30℃时可稳定4h，在0C时可稳定60h

抑制蛋白酶种类：可抑制枯草杆菌蛋白酶及thermitase

34、Subtilisin Inhibitor Ⅱ

有效浓度：10~100uM

工作浓度：1:100倍稀释至终浓度100uM

贮存液配制：1mg/210.3ul溶于DMSO或乙醇（10mM）

稳定性：其pH5~9的工作液在30℃时可稳定4h，在0℃时可稳定60h

抑制蛋白酶种类：可抑制枯草杆菌蛋白酶及thermitase

35、Subtilisin Inhibitor Ⅲ

有效浓度：10~100uM

工作浓度：1:100倍稀释至终浓度100uM

贮存液配制：1mg/198ul溶于DMSO或乙醇（10mM）

稳定性：其pH5~9的工作液在30℃时可稳定8h，在0℃时可稳定120h

抑制蛋白酶种类：可抑制枯草杆菌蛋白酶及thermitase

36、Subtilisin Inhibitor Ⅳ

有效浓度：10~100uM

工作浓度：1:100倍稀释至终浓度100uM

贮存液配制：1mg/194ul溶于DMSO或乙醇（10mM）

稳定性：其pH5~9的工作液在30℃时可稳定6.5h，在0℃时可稳定100h

抑制蛋白酶种类：可抑制枯草杆菌蛋白酶及thermitase

37、Subtilisin Inhibitor Ⅴ

有效浓度：10~100uM

工作浓度：1:100倍稀释至终浓度100uM

贮存液配制：1mg/181ul溶于DMSO或乙醇（10mM）

稳定性：其pH5~9的工作液在30℃时可稳定4h，在0℃时可稳定60h

抑制蛋白酶种类：可抑制枯草杆菌蛋白酶及thermitase

38、TLCK

有效浓度：10~100uM

工作浓度：1:100倍稀释至终浓度100uM

贮存液配制：5mg/1.354ml溶于水或甲醇（10mM）

稳定性：pH>7.5时非常不稳定

抑制蛋白酶种类：可抑制胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶，包括菠萝蛋白酶、Arg-C内切蛋白酶、无花果蛋白酶、木瓜蛋白酶等

39、TPCK

有效浓度：10~100uM

工作浓度：1:100倍稀释至终浓度10uM

贮存液配制：5mg/1.354ml溶于甲醇（10mM）

稳定性：工作液可稳定几个小时，贮存液在4℃下可稳定几个月

抑制蛋白酶种类：可抑制胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶，包括菠萝蛋白酶、糜蛋白酶等

40、Trypsin Inhibitor,soybean

有效浓度：与需抑制的蛋白酶等摩尔浓度

工作浓度：与需抑制的蛋白酶等摩尔浓度

贮存液配制：20mg/ml（1ml）

稳定性：在低pH值情况下易分解，其贮存液在-20℃时相当稳定

抑制蛋白酶种类：抑制FactorXa及胰蛋白酶