之前给大家分享过Co-IP的解读，今天就给大家带来WB图片的解读，下面就一起学习吧~

一、WB-磷酸化

1. 图片解读

(1) 处理条件：每组样本都经过了不同时间的LPS（脂多糖）处理，时间点为0h、2h和4h

(2) 样本分组：两组样本，分别是WT（野生型）和KO（敲除型）

(3) 分子量标记：kDa数值表示蛋白质的分子量，用于估计检测到的蛋白条带的大小

(4) 条带分析：KO组的Jnk蛋白的磷酸化水平（P-Jnk）明显高于WT组。同理可观察其他蛋白的磷酸化条带

(5) P-lkkα/β和Ikkα/β：检测Ikkα/β蛋白的磷酸化状态（P-）和总蛋白量。lkkα/β、lkbα、Jnk、p38蛋白均属于NF-κB或JNK通路的相关蛋白

(6) Cypj：实验相关蛋白，在本实验中KO组敲除的是Cypj，因此在KO组中没有Cypj条带

(7) Tubuin：作为内参蛋白，用于校正蛋白加载量的差异，确保各泳道的蛋白加载量一致

2. 结果解读

(1) 用LPS处理野生型和Cypj敲除组0h、2h、4h后，用Western Blots检测Ikka/BIkba、Jnk和p38的磷酸化水平。根据实验结果发现，Cypj缺乏增加了NF-KB和JNK通路中这些激酶的磷酸化

3. 常见问题

(1) 为什么P-lkka/B、lkka/B、P-Jnk、Jnk泳道中出现两个条带?

因为蛋白存在不同亚型，它们在分子量上有所差异，因此在WB中会显示出多个条带

二、WB-泛素化

1．图片解读

（1）MG132：一种蛋白酶抑制剂，能够抑制26S蛋白酶体（泛素-蛋白酶体系统，UPS）的活性。UPS负责降解泛素标记的蛋白质，维持蛋白质质量并调节蛋白水平。MG132阻断这一过程，使得泛素标记的蛋白质在细胞内积累

（2）Vector：对照组，表示一个不含目的基因的载体被导入细胞中

（3）“+”“-”标记：“+”表示添加该条件，“-”表示未添加该条件

（4）His-PSAT1：目的蛋白，给PSAT1蛋白加了His标签

（5）kDa：分子量的单位，被用作一个标准，帮助确定观察到的条带是否是正确的分子量

（6）IP:HiS：用His抗体做IP，分别下拉His和Ub分子；可以明显观察到，添加了MG132的His-PSAT1样本泳道更暗（Ub表达量更多）

（7）Input：指加载到WB膜上的原始样本的一部分，通常用于显示加载量是否一致，从而作为判断不同条带之间信号强弱的依据

（8）Tubulin：一种常用于细胞骨架标记的蛋白，在WB中作为内参蛋白可以校正不同泳道中的蛋白上样量，确保每个泳道中的蛋白量相同

2．结果解读

（1）该实验研究了MG132处理下PSAT1的泛素化。结果表明，添加MG132后，PSAT1的泛素化显著增加。

3．常见问题

（1）为什么泛素化条带会拖尾？

①泛素分子的分子量在8.5kDa左右，而泛素化是由许多泛素分子串联起来的，因此泛素化没有固定大小，跑出来就是一串长条带；

②其他原因还包括上样量过大、样本降解或样品中有杂质、一抗浓度过高或孵育时间过长等。

三、WB-乙酰化

1．图片解读

（1）Ac K298和Ac K302条带：这两个是赖氨酸乙酰化（Ac）的位点，分别在赖氨酸298和302位点（二者位于C/EBPα上）。可以看到【HL-60+HDACi】组的条带强度明显增加，而【32D+G-CSF】组的条带信号显著减弱，这可能表明HDACi处理增加了K298、K302位点的乙酰化水平，而G-CSF的增加则降低了这些位点的乙酰化

（2）C/EBPa：一种转录因子参与调节多种基因的表达

（3）GCN5：一种组蛋白乙酰转移酶，参与组蛋白的乙酰化。【32D+G-CSF】组的条带信号显著减弱，表明G-CSF的添加降低了GCN5的表达

（4）样本分组：分为4组样本，HL-60和32D是两种细胞系，HDACi是一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂；IL-3为白细胞介素，32D细胞的生存和增殖依赖于IL-3；G-CSF是粒细胞集落刺激因子。在去除IL-3和加入G-CSF后，32D细胞很容易分化为成熟的粒细胞

（5）分子量标记：kDa数值表示蛋90 kD白质的分子量，用于估计检测到的蛋白条带的大小

（6）β-actin：作为内参蛋白，用于校正蛋白加载量的差异

2．结果解读

（1）Western blot结果显示，在G-CSF启动分化前(没加入G-CSF前)，32D细胞中C/EBPa的K298和K302位点乙酰化富集。而在G-CSF诱导下，K298和K302的乙酰化水平降低，这与GCN5蛋白表达的减少相一致。

3．常见问题

（1）蛋白乙酰化，除了跑WB，还有哪些检测方法?

（2）除了WB之外，检测蛋白乙酰化的方法还包括免疫荧光、免疫共沉淀、质谱分析、蛋白质芯片等。WB在成本和易用性上具有优势，能提供乙酰化蛋白定性和半定量信息，而质谱分析则可以提供精准的乙酰化位点信息，但技术要求高、成本高。

四、WB-乳酸化

1．图片解读

（1）Pan-Kla 条带：Pan-kla是指组蛋白H4第12位赖氨酸乳酸化修饰（-la），它也被称为泛乳酸化修饰泛抗体，因为它能够检测细胞内所有蛋白质的乳酸化修饰。在Lactyl-CoA存在的情况下，信号较弱/无信号；而在LactyI-CoA与TIP60共同存在时，信号增强，这可能表明TIP60对乳酸化赖氨酸有影响

（2）实验条件：LactyI-CoA（乳酸酰辅酶A）、NBS1、TIP60（组蛋白乙酰转移酶）的存在或缺失（用“+”表示存在“-”表示缺失）

（3）分子量标记：表示蛋白质的分子量。所有检测的蛋白质分子量都在100kDa左右

（4）NBS1-K388la条带：该条带显示了NBS1蛋白在第388位赖氨酸的乳酸化修饰。在LactyI-CoA存在时，信号较弱/无信号，而在Lactyl-CoA与TIP60共同存在时，信号增强，这可能表明TIP60对NBS1-K388的乳酸化也有影响

（5）NBS1条带：该条带显示了NBS1蛋白的总量。所有条件下NBS1的表达量相对稳定，说明实验条件对NBS1蛋白的总量影响不大。NBS1是一种在细胞DNA损伤修复中起关键作用的蛋白质

2．结果解读

（1）体外赖氨酸乳酸化实验证实TIP60介导NBS1-K388的乳酸化