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冻存、复苏细胞的办法和注意事项

冻存、复苏细胞的办法和注意事项之细胞冻存：1. 时机不会：细胞状况不好（长的太过了，培养液现已很黄；细胞可疑污染；细胞已经开始凋亡或崩解；连续培养超越二个月，细胞性状已有改动改动）佳机遇：细胞增殖旺盛，状况安稳，实验作用杰出，复苏后两周内2. 细胞太少：冻存时细胞浓度低于1-5×1000,

稳转细胞株可以稳定传多少代

随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。1. 转染的分类：物理介导、化学介导和生物介导三类途径。物理介导：电穿孔法、显微注射和基因枪法；化学介导：经典的

细胞稳转株构建病毒法

病毒法① 确定目标细胞系的相关信息，细胞的培养条件，细胞的增值速度，支原体污染情况；② 预实验确定MOI值，可通过查阅文献确定慢病毒在目标细胞系中的MOI值也可参考查阅得到的数据，设计梯度实验，摸索最适MOI；③ 预实验确定筛选药物用量，常用的药物筛选有：puro、G418、潮霉素等；④ 细胞铺板，将

内细胞中间密两边稀如何解决

这是典型的“过犹不及”。我们在接种细胞的时候通常使用“十字摇匀法”，即前后、左右各来回几次。但很多人担心摇的次数少会造成细胞分布不均匀，就反复多次地摇，结果细胞全部集中在中间。其实只要把握好幅度和力度，前后、左右交替摇三四次就已经足够了，不论孔板、皿或者培养瓶。对于孔板这样的较小的容器，实际每孔

软琼脂法实验服务周期及流程（如何作好软琼脂实验分析）

软琼脂法实验服务周期及流程软琼脂法实验是一种测定细胞转化及致瘤性的实验方法。该实验需要细胞锚定非依赖性生长状态（肿瘤细胞生长特性）。相比于2D单层培养，该3D培养法的生长条件可以更准确地反映出癌细胞的自然生长环境，因此动物实验进行之前的软琼脂法实验是至关重要的。实验前，将细胞（用致癌物质或致癌

细胞免疫荧光实验注意事项盘点

细胞免疫荧光实验注意事项盘点1、建议细胞直接种孔板，采用倒置荧光显微镜拍照，这样可以避免最后挑片时造成划片或细胞片破损以及最后封片可能造成滑片等结果；2、若实验室只有正置荧光显微镜，则需要将细胞植于细胞爬片。1）建议直接购买处理过的细胞爬片；2）若只有普通细胞爬片，可以先将爬片于浓酸

如何做好免疫荧光实验

免疫荧光是标记免疫技术发展最早的一种，它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术，通过将抗体与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。免疫荧光步骤包括，细胞固定和通透，封闭，孵育一抗，二抗等。除了这些基本步骤，以下斗前建议可以帮助您获得更好的实验结果。

直接免疫荧光和间接免疫荧光染色方法的异同

直接免疫荧光和间接免疫荧光染色方法的异同1组织用4%多聚甲醛固定6-8小时，转至20%蔗糖搜尘溶液至组织沉底。2冰冻切片8-10μm，推荐瑞沃德冷冻切片机，温度稳定，切片质量高。室温放置30分钟以上防脱片，-20℃保存。从冰箱拿出的冰冻切片在室温放置30分钟以上再进行免疫荧光。31xPBS洗3次，每次3-5分钟。

蛋白质沉淀与变性的关系

蛋白质沉淀与变性的关系1、性质不同蛋白质从溶液中析出的现象，称为蛋白质的沉淀。蛋白质的变性（denaturation），在某些物理和化学因素作用下，其特定的空间构象被破坏，即有序的空间结构变成无序的空间结构，从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失，称为蛋白质的变性。2、结果不同蛋白质沉淀，破

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