基础信息

　　HMC3细胞培养条件

　　培养液：MEM(含NEAA)＋10% FBS＋1% P/S

　　二氧化碳培养箱：稳定的温度（37℃），稳定的CO2水平（5%）

　　生长特性

　　贴壁，巨噬细胞样

　　传代比例和频次

　　推荐1:3~1:5传代，每3~4天传代一次

　　细胞类型

　　小胶质细胞

　　形态学

　　巨噬细胞

　　背景介绍

　　HMC3细胞系，是通过人胎脑源性原代小胶质细胞培养物的 SV40 依赖性永生化建立的，静息 HMC3 细胞的小胶质细胞/巨噬细胞标志物IBA1呈强阳性，星形胶质细胞标志物GFAP呈阴性。

　　活化小胶质细胞的标志物，即MHCII、CD68 和 CD11b，在静息 HMC3 细胞中呈阴性，但在被 IFN-γ（10ng/mL，24 小时）激活后上调。

　　具体应用

　　神经科学，神经炎症

　　转化的人小胶质细胞代表可以无限生长的同质细胞群，并且可以用于小胶质细胞功能的生化分析的便捷系统。正如实验所证明的，它们还可以进行转染，这对研究小胶质细胞中各种转染基因的表达调控有重要意义。

　　hmsc细胞培养注意事项

　　1 2-3天换液一次；

　　2 培养过程中可能会有细胞碎片产生，及时换液除去即可。

　　传代步骤

　　1 吸出原培养液；

　　2 加入2mL左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出PBS丢弃；

　　3 加入1mL左右胰酶，轻轻晃动培养瓶，使之浸润所有细胞；

　　4 放入培养箱消化，消化2-3分钟，轻拍培养瓶侧壁，显微镜下看到细胞脱壁且聚集的细胞团松散开后，可终止；

　　5 加入3mL含血清的培养基，终止消化，吹打细胞使之脱壁，并在液体里反复吹打，使细胞混匀为悬浮液，这时可以在显微镜观察；

　　6 收集细胞悬液离心，1200rpm/min 3分钟，离心完吸出上清丢弃；

　　7 加入新鲜培养基，吹打几下混匀细胞即可；按需接种到新培养瓶，补足培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养；

　　8 检查培养箱二氧化碳、温度和水盘。

　　换液步骤

　　1 吸出旧培养基，用PBS进行润洗，然后加入新的培养基；

　　2 每2~3天换液一次。

　　冻存步骤

　　1 配制冻存液，冻存液推荐配比：55%（基础培养基DM/F12）+40%(血清)+5%（DMSO）；

　　2 DMSO配制的时候会发热，一定要等冻存液冷却后使用，避免灼伤细胞；

　　3 细胞消化下来制成细胞悬液；

　　4 1200rpm 3分钟离心后去上清，尽量吸干净上清；

　　5 加入配制好的冻存液重悬，建议一个T25长满，冻存1支，或者细胞计数后，按照3~5×106cells/支冻存；

　　6 分装好的冻存液转入程序冻存盒，放入-80℃冰箱过夜；

　　7 从-80℃冰箱取出冻存管，并迅速转移到液氮长期保存。

　　复苏步骤

　　1 将水浴锅预热至37℃，准备好干净的一次性PE手套，向一个无菌离心管内加入5mL无菌培养基；

　　2 将细胞从液氮罐中取出，放入PE手套中，迅速没入水浴锅，摇晃冻存管，使细胞快速溶解，以1分钟内全部溶解为宜；

　　3 在超净台中，将复苏好的细胞液加入到装有新鲜培养基的离心管内，1200rpm/min离心3分钟，离心完毕去掉上清；

　　4 取适量专用完全培养基重悬细胞，接入到无菌容器中（培养瓶或培养皿），补充培养基到适宜，放入培养箱培养；

　　5 溶解过程要快，已溶解的冻存细胞在常温中尽量短时间存放，尽快离心去除DMSO。

HMC3细胞正常生长