腺病毒常用的纯化方法(腺病毒需要纯化吗)

2022-04-04 10:40:49

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　　腺病毒既可以用于体内实验，也可以用于体外实验。如果是用于体外实验，可以选择非纯化的病毒；当用于体内实验时，则需要进行病毒纯化。因为未纯化的病毒液中含有缺损病毒颗粒、细胞碎片、培养基等杂质，这些杂质如果被注入动物体内，会引起宿主显著的免疫学反应。另外，纯化浓缩后的病毒滴度更高，更适合体内注射。

　　腺病毒常用的纯化方法为氯化铯或碘克沙醇密度梯度离心法，现以碘克沙醇密度梯度离心法为例，介绍一下腺病毒的纯化浓缩方法：

　　1.腺病毒纯化

　　（1）配制不同浓度的碘克沙醇；

　　（2）取一个超离管，用电动移液器逐层加入不同浓度的碘克沙醇。

　　（3）将处理好的病毒液加入到最上层；

　　（4）超速离心，48000rpm 2.5h。离心前应将对应的超离管配平，误差控制在0.1g以内。

　　2.腺病毒浓缩

　　(1)离心完毕后，将超离管底用针头刺破，收集腺病毒所在层至15mL管中；

　　(2)将收集的病毒液用冻存缓冲液稀释至体积15mL，然后用0.2μm的滤膜过滤；

　　(3)将过滤后的液体置于一个15mL的超滤管中，3500g离心50min，一般离心2-3次达到预定体积；

　　(4)将超滤管中剩下的液体反复吹打后吸至病毒储存管中，标明名称和日期。

　　(5)将收集起来的病毒涡旋震荡混匀后离心，吸10μl病毒液进行滴度检测。