你的父母是否经常警告你关于 5P 的成长？“适当的准备可以防止表现不佳。”

　　事实证明，当谈到微生物学时，他们再正确不过了。

　　单细胞基因组学需要高度特异性的样本来处理。在大多数情况下，您从一个充满未知细胞群的异质样本开始，然后您的工作就是分类、分离、测序，然后进行研究——通常是按照这个顺序。准备样品从何而来？有哪些技术可以帮助这一过程中的关键步骤？

　　让我们来了解一下。

　　继续阅读以了解更多有关细胞分选器如何发挥作用的信息。

　　样品制备的目标是什么？

　　无论您是对细胞中的 mRNA 进行单细胞测序 、准备细菌群以进行抗菌测试，还是开发药物，您都可以通过样品细胞制备来实现一些特征。

　　您需要健康、有活力的细胞。这是最重要的——如果您的技术对您的细胞壁造成过度损伤，它们可能会进一步裂解并破坏您的样品。同样，如果您使用的任何机器具有较高的内部压力，则可能会发生细胞凋亡，从而为您留下以下细胞样本：

　　由于过度损坏而不太可能正常工作

　　将提供错误和不准确的测序数据

　　单个细胞。如果不只使用一个细胞，什么是单细胞基因组学？这需要没有团块或粘性细胞的单细胞悬液，以便您可以使用其他技术分配或捕获单细胞。研究单个细胞内的单个分子需要单细胞多组学。

　　您需要一个无碎屑和无污染的样品。在细胞生物学领域工作时，您在微米和纳米级别之间工作（在细胞器、蛋白质、DNA 和RNA的情况下） 。因此，“碎片”或“污染物”可能就像试图清理沙箱时有游轮停泊在其中。碎片可能导致机器堵塞、误报，并可能浪费数周等待克隆种群扩大的时间。仅清洁样本！

　　对于大多数研究，您还需要高基线人群。细胞系如此具有革命性的原因之一是，在正确的培养基和条件下，您可以让细胞无限增殖。例如，世界各地每个实验室的每个 CHO 细胞都来自同一只雌性仓鼠。对于实验室中的实验，您需要大量人群来测量结果、确认准确性，并在某些情况下证明同质性和适当的克隆扩增。

　　目标直接在您面前，您现在可以适当地瞄准。让我们谈谈准备样品的细节。

　　准备样品 | 技巧和窍门

　　单细胞制备技巧和窍门都可以总结为蛋奶酥（或儿童）所需的相同建议：小心对待。否则它可能会爆炸或放气……蛋奶酥……不是孩子们。

　　虽然有一些去除死细胞的方法（详见下文），但您不想依赖“先行动，后去除”。因为在有死细胞的地方，也有即将死去的细胞（裂解；细胞凋亡）、不健康的不能再生的细胞，以及全能的不活细胞。虽然很容易区分死细胞和快乐、健康的细胞。当你在死亡的范围内旅行时，它变得更加困难。

　　为了避免所有的光谱、楼梯和不祥的黑暗走廊……死亡，让我们通过在以下情况下谨慎行事来保持细胞的健康和活力：

　　清洗样本——您通常会被要求用磷酸盐缓冲盐溶液 (PBS) 清洗您的细胞样本。这需要彻底（但温和）洗涤方案，将细胞悬浮并放入离心机中。这使您可以更轻松地移取 PBS，留下细胞沉淀。

　　移液– 移液是其中一种技术，通过大量练习，您可以真正 精通。然而，因为你在荧光太阳下的所有事情上都使用了这种技术，所以通过大量的练习，也很容易变得非常懒惰。在这里将重申样品制备中移液的两个基本原理（因为您的教授可能在您的学生时代回应了这一点）：

　　即使使用大口径移液器，移液器的力量也会损害细胞活力并对样品质量产生负面影响。始终以温和和一致的压力为目标。

　　因为细胞溶液可以快速沉淀（在顶部或底部），所以立即移液很重要，并且每次都从孔的中间移液。这将防止不一致的样本。

　　细胞分选和分选后分析——您可能会使用流式细胞仪等机器对细胞进行分选，但由于分选压力很大，细胞分选过程虽然是必要的，但可能会导致大量细胞死亡。因此，您需要进行分拣后分析，以确定分拣后样品的生存能力。

　　注意：虽然传统的细胞分选器会导致大量细胞死亡（内部压力超过 20 psi），但有新技术使用小于 2 psi 的内部压力来显着改善这一过程步骤。请参阅下一节：帮助制备样品的技术 。

　　去除任何死亡或无法存活的细胞——因为死亡、无法存活的细胞更容易裂解并在您的样品中形成团块，因此去除它们至关重要，以免它们影响群体中的其他健康细胞。因此，通过去除死细胞，您可以更好地为下游分析准备样品。

　　样品制备后储存——当您完成洗涤、过滤、移液操作并去除死细胞以创建完全分离的样品后，可以在运行分析之前将细胞悬液置于冰上一小段时间。尽管对于确切的临时存储需求，请务必确定不同细胞类型的适当条件。

　　虽然记住这些基本技术非常重要，并且可以帮助您以简单而有意义的方式改善您的实验室结果，但也有一些技术可以在此过程中提供帮助。

　　帮助制备样品的技术

　　从流式细胞仪到单细胞克隆，有一些技术正在迅速发展以帮助单细胞基因组学。一些比较流行的包括：

　　流式细胞仪-荧光激活细胞分选 (FACS) – 该技术通常与流式细胞仪结合使用。例如，如果您有需要分选的异质样本，您可以使用荧光抗体标记目标细胞类型，然后可以从异质群体中分拣出这些细胞。然而，由于高压和减压冲击，这通常会对细胞产生剪切应力。

　　这就是 NanoCellect 的WOLF 细胞分选器的用武之地。了解研究人员的这个痛点，Wolf 细胞分选器利用低内部压力（低于 2 psi）来创建一个不会损害细胞活力的高效流式细胞仪。此外，它使用一次性墨盒来避免交叉污染，并为初学者和专家提供直观的软件。

　　什么是没有样品准备的单细胞基因组学

　　没有样品准备的单细胞基因组学就像没有钻石的棒球；没有电梯的天际线公寓大楼；没有奶酪的熟食店！

　　所有这些，包括单细胞基因组学，在没有它们的合作特征的情况下，在技术上都是可行的。尽管对于公寓大楼、熟食店、棒球，甚至是单细胞基因组学，您的父母可能会反对“适当的准备”和“防止表现不佳”。

　　为了让您的父母和 您使用的单个细胞感到高兴，请确保将 5 P 应用于您的细胞分类过程。

　　在 NanoCellect，我们知道快乐的细胞……快乐的父母是另一回事。

　　资料来源：

　　罗杰癌症中心。样品制备。https://www.rogelcancercenter.org/single-cell-analysis-core/sample-preparation-and-costs

　　咬大小生物。防止移液错误破坏实验的 17 种方法。https://bitesizebio.com/344/17-ways-to-stop-pipetting-errors-ruining-your-experiments/

　　NCBI 。通过荧光激活细胞分选 (FACS) 纯化特定细胞群。https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3144656/

　　NCBI 。流体动力聚焦——一种多功能工具。 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3251643/