C2C12 (小鼠成肌细胞)是由D·Yaffe和O·Saxel建立的小鼠成肌细胞株的亚克隆。C2C12细胞分化很快，容易形成可伸缩的肌管并生成特征性的肌蛋白。用骨形成蛋白2(BMP-2)处理C2C12细胞，会导致C2C12细胞的分化途径从成肌细胞转换为成骨细胞。

　　C2C12作为研究肌肉理想的细胞模型，在实验研究中常诱导其分化为多核肌管。成肌分化在肌肉再生中起重要作用，它是通过一种高度协调的序列程序来产生成熟的骨骼肌的过程。

　　基础信息

　　生长特性：贴壁细胞

　　细胞形态：成肌细胞样

　　生长培养基：DMEM＋10% FBS＋1% P/S

　　推荐传代比例：1:3-1:4

　　推荐换液频率：2~3次/周

　　倍增时间：~20小时

　　冻存条件：

　　冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

　　温度：液氮

　　培养条件：

　　气相：空气，95%；CO2，5%

　　温度：37℃

图1. C2C12细胞正常生长

　　细胞状态直接影响着分化潜力，要想C2C12细胞分化做得好，首先要在培养上下功夫。该细胞的换液和传代步骤，参照其他贴壁细胞进行操作即可。除此之外，还有以下三点，需要留意：

　　1

　　该细胞生长速度快，容易分化，建议密度达70%时传代；

　　2

　　不要让细胞长得太满甚至开始融合，影响后续成肌分化率；

　　3

　　细胞消化完全后再吹打混匀，不要用枪头把没有消化好的细胞吹下来，以免细胞成团。

　　待细胞生长至汇合度为80%左右时，即可进行诱导分化。具体步骤如下:

　　01

　　丢弃旧培养基，用PBS清洗两次；

　　02

　　换分化培养基（高糖DMEM+2%马血清+1% P/S）诱导，然后置于CO2恒温培养箱中进行培养；

　　03

　　每24h换液一次，在显微镜下观察细胞形态和生长状况。诱导分化成功时，可以看见肌管表现为厚的管状结构，有时为多核。

图2. C2C12细胞分化

　　小贴士

　　■ 细胞代数不要太高；

　　■ 若加入分化培养基后，细胞仍然继续生长，可用吉姆萨染色验证是否有分化了的肌纤维；

　　■ 成肌分化过程中会有少量细胞凋亡，属于正常现象。

　　参考文献

　　[1]张琳. EPA和DHA对C2C12成肌细胞增殖,分化和凋亡的影响[D]. 武汉轻工大学, 2018.