简介
用加样枪或Pasteur吸管吸取集落,移至培养瓶或多孔板的培养孔中。
操作方法
悬浮细胞克隆的分离
原理
用加样枪或Pasteur吸管吸取集落,移至培养瓶或多孔板的培养孔中。
材料与仪器
生长培养基多孔板培养瓶解剖显微镜移液器粗头笔黄色枪头
步骤
用倒置显微镜观察培养皿中的细胞,用毡制粗头笔或Nikon标记笔标记出集落。
2.24孔板的每一孔中加1 ml培养基。
3.解剖显微镜(20~50×放大)下挑取集落
(a)每一个细胞集落用一个枪头(加样枪上的黄色枪头)。
(b)将移液器调至100μl。
(c)先用枪头吸大约50μl的培养基,将该枪头对准要分离的集落,在集落内轻轻吸取剩余的50μl。
4.将吸取物移至24孔板,用培养基冲洗集落,如果培养基中含美希索,集落就会固定、黏附,然后生长;如果培养基含有琼脂,则需用吸管在培养孔内上下吹吸集落几次,分散琼脂。细胞克隆也可以直接移至竖直放置的25 cm2的塑料培养瓶中。