如何鉴定基因鼠

　　1.鉴定基因鼠可以取小鼠的脚趾或尾尖（<5mm），一般1-2mm即可获得足够量 DNA 用于基因型鉴定。断趾操作一般剪取的鼠爪量为鼠爪趾尖组织，但若需要在剪趾作基因鉴定的同时，以剪趾作为小鼠的标记，则应尽量将整个脚趾剪下，以免后续组织长回愈合后分辨不清小鼠的编号。

　　2.剪趾或剪尾最好在出生后7-12天内完成，一方面既可避免母鼠吃仔，另一方面该时段的大小鼠容易抓取、出血较少，提取的基因组质量较高。

　　3.想要获得正确的鉴定信息，首先要正确取样，即避免小鼠在剪趾或剪尾过程的污染。如果上一只小鼠的血液和体液残留在剪刀上，就会将它的 DNA 带到下一只小鼠的组织上；而使用这样的组织做鉴定，则会导致假阳性的出现。

　　正确的做法应当是在每一次剪鼠尾之前，都用75%酒精擦拭清洁剪刀；或准备两把剪刀轮流使用，用完的剪刀浸泡在75%酒精溶液中。

　　鉴定流程

　　取需要鉴定的小鼠鼠尾或脚趾，按试剂盒步骤提取DNA，进行聚合酶链式反应后，凝胶电泳鉴定。鉴定阳性后，可将PCR产物进行测序，从而进一步确认小鼠的基因型。

　　完全性基因敲除鼠的鉴定之一对引物

　　将引物设计在敲除区域的两端，如下图所示F1和R1引物。

　　敲除后的基因片段比原来的野生型基因片段要短，因而可以通过凝胶电泳看PCR产物的大小来判断基因型。

　　预期的电泳结果示意图如下：

　　若电泳结果只有条带1，则判断为阳性纯合鼠（-/-)；若电泳结果只有条带2，则判断为野生鼠（＋/+)；若电泳结果有条带1和条带2，则为阳性杂合鼠（+/-）。

　　完全性基因敲除鼠的鉴定之两对引物

　　若敲除的片段过大，不精提基因组或不使用高保真高扩增效率的聚合酶，一般大于2,000 bp的条带会较难扩増。即图示中敲除区域大于2,000 bp时，野生型条带无法扩增，电泳结果中将无条带2。则只能区分野生型鼠和阳性鼠，无法判定阳性鼠是否为杂合或纯合。此时就需要再设计一条位于敲除区域内的引物R2（如下图所示），使用3条引物用短片段体系即可判断基因型。

　　预期的电泳结果示意图如下：

　　若电泳结果只有条带1，则判断为阳性纯合鼠（-/-)；若电泳结果只有条带3，则判断为野生鼠（+/+)；若电泳结果有条带1和条带3，则为阳性杂合鼠（+/-)。

　　若两对引物预期片段大小相差仅几十 bp ，在有实验误差的情况下，同一胶图可能较难区分两条条带。因此，一般是将三条引物分2个体系进行，先判断是否阳性，再进一步判断纯杂合。

　　点突变小鼠的鉴定

　　许多疾病的发生和点突变更密切相关，所以构建点突变的小鼠模型也很常见，但点突变小鼠的基因型鉴定稍复杂一些。由于点突变只是单碱基或少数碱基的增加、缺失或替换，在电泳图上突变片段与野生型条带的大小是无法区分的。因此，点突变小鼠除了PCR外，还需要结合测序或者酶切来鉴定。

　　选择在发生点突变的上下游片段设计引物（如下图所示）。若突变后的序列正好是某种酶特异识别的位点，在设计引物时还要使酶切点两边的片段大小有区分。

　　若突变后的序列正好是某种酶特异识别的位点，就可以用酶切实验进行验证。酶切成功则发生点突变的片段被切为两段，野生型的不会被酶识别切割。反之，若突变前的序列正好是某种酶特异识别的位点，也可同理进行鉴定。

　　但这两种情况均极罕见。使用引物扩增后电泳，通过条带大小只能大概判断扩增产物是否为目的基因。想要判断是否有突变，还需要切胶回收，送去测序。测序结果可在DNAMAN等软件上比对分析，即可判断目的碱基是否有突变。