H9c2(2-1)(大鼠心肌细胞)是由胚胎BD1X大鼠心脏组织衍生的原始克隆细胞系的亚克隆,并表现出骨骼肌的许多特性。该细胞中的成肌细胞能融合形成多核的肌管,并对乙酰胆碱的刺激发生反应。如果培养基中的血清浓度下降到1%,H9c2(2-1)细胞融合会发生得很快。该细胞系是检测细胞发育的有效模型系统[1]。
本期为大家总结了,在培养H9c2(2-1)细胞过程中,特别需要注意的地方。
细胞复苏
溶解细胞过程要迅速;已溶解的冻存细胞不能在常温下存放太久,需要尽快离心去除DMSO。
细胞冻存
推荐配比:55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO的冻存液;
细胞冻存时,尽量吹散细胞,注意控制吹打力度。
细胞培养
H9c2(2-1)细胞为贴壁细胞,正常细胞形态为梭形。
培养条件
培养基:DMEM+10%FBS+1%P/S
推荐传代比例:1:2-1:4
推荐换液频率:2~3次/周
培养箱:37℃,5%CO2
传代操作
去掉培养皿中的培养基,加入PBS进行冲洗,并去上清;
加入0.25%胰酶进行润洗,并去上清;
放入CO2培养箱消化2-4min;
加入完,全培养基终止消化,并吹打均匀。
常见问题及解答
为什么会出现细胞表面颗粒较多的现象?
可能是培养环境有问题,可以改用DMEM/F-12培养基培养,传三代后会恢复平整细胞表面。
为什么会出现空泡?
可能是铺板时铺得不够均匀,局部过于密集,密集地方的细胞就开始状态变差、空泡增多。也可能是血清差,需要更换优,质血清,及时换液。
为什么细胞长得慢?
可能是细胞接种得太少,细胞密度太低。可以先培养,然后消化重新铺瓶,提高密度培养。
为什么细胞状态变差,容易漂?
可能是血清问题,建议换血清,并注意血清要程序解冻,不能水浴化开;也有可能是细胞生长密集,需要及时传代,并不是细胞长满才传代,当有个别地方长得过于密集,容易叠加的时候应该就要传代了。