在许多细胞内蛋白表达、纯化及蛋白-蛋白互作等实验(如WB、IP、Co-IP、ChIP)中,细胞裂解是关键一步,以下是我们整理的8种常见的组织/细胞裂解液,大家在做实验时需要根据不同的作用原理、组分、特点和具体用途进行选择~
1. RIPA裂解液(强/中/弱)
原理:一种传统的可用于裂解细胞或组织的快速裂解液,主要利用表面活性剂等裂解细胞膜(包括核膜),从组织或细胞中抽取可溶性蛋白。
组分:25mM Tris-HCl(pH7.6)、150mM NaCl、1%NP-40、1%去氧胆酸钠、0.1%SDS等。(PS:组分不同,裂解强度不同)。
特点:裂解强度分为强、中、弱三种;裂解效果好,适合复杂蛋白提取;对蛋白质变性的干扰小,含有Protectin等保护剂,能够减少蛋白质在提取过程中的变性;简便易用,通常只需室温下操作处理即可。
用途:主要用于WB、IP、CO-IP实验。
2. SDS裂解液
原理:是一种比较强烈的细胞组织裂解液,可裂解核膜。基于其表面活性剂的性质,降低细胞膜表面张力,破坏细胞膜的结构,使细胞内容物释放出来。
组分:250mM Tris(pH7.4)、10%SDS、sodiumfluoride、EDTA等。
特点:亲水性强;乳化和分散能力强,能将油、脂和其他不溶于水的物质分散在水中,形成乳浊液;生物降解性好,在适当条件下可被微生物分解。
用途:主要用于WB、IP、CO-IP、ELISA实验。
3. Tris-Triton裂解液
原理:利用去污剂Triton X-100破坏脂质双分子层,溶解胞质和细胞膜,破坏分子间微弱结合键的大部分蛋白质抗原;其内含的多种蛋白酶抑制剂还可有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。
组分:10mM Tris(pH7.4)、100mM NaCl、1mM EDTA、1mM EGTA、1%TritonX-100、10%甘油、0.1%SDS、0.5%去氧胆酸钠。
特点:裂解条件较为温和,可以有效裂解细胞膜,但不会破坏蛋白质结构;能够较好地保持蛋白质活性。
用途:主要用于WB、IP实验。
4. ACK裂解液
原理:含有主要效应物质氯化铵,氨根离子不能通过细胞膜,而其他离子可以通过,造成细胞内外的离子浓度差异,形成了渗透压差,外部的水分会扩散至细胞内,使红细胞膨胀,达到裂解的效果。
组分:150mM NH4CL、10mM KHCO、0.1mM Na2EDTA。
特点:具有高效的裂解能力,能够快速分解有机物;耐热性好,可在较高温度下使用;可能有毒,使用时需谨慎,需在通风良好的环境中操作。
用途:用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化,淋巴细胞的分离纯化以及组织细胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。
5. NP-40裂解液
原理:是一种双链DNA结合蛋白的特异性裂解试剂,通过NP40蛋白与DNA分子结合,导致DNA的性质发生变化,从而使得双链DNA发生断裂,以达到分离蛋白质与DNA的目的。
组分:50mM Tris-HCI(pH8.0)、150mM氯化钠、1%NP-40。
特点:具有优异的表面活性、溶解性、渗透性、稳定性和适应性,同时对生物体系相容性较高。
用途:主要用于WB、IP、CO-IP实验。
6. Urea裂解液
原理:利用尿素的渗透压特性,使细胞膜破裂,释放出细胞内的物质。
组分:Urea、阳离子表面活性剂(CHAPS等)、Tris-HCI缓冲液。
特点:裂解强度较为温和,不会破坏蛋白质或DNA的结构,可保留生物活性分子;裂解效丰高,能够有效地裂解多种类型的细胞,包括细菌、真菌和哺乳动物细胞;具有裂解可控性。
用途:常用于蛋白质提取实验。
7. Tris-HCL裂解液
原理:利用Tris缓冲液维持溶液的pH值,并通过添加盐和去垢剂来破坏细胞膜和细胞器,从而释放出蛋白质。
组分:NaCl、去污剂(TritonX-100/NP-40)、蛋白酶抑制剂、RNase抑制剂。
特点:裂解能力较为温和,能够有效地裂解细胞膜,但不会破坏蛋白质和核酸的结构;pH具有良好的缓冲能力,可以稳定溶液的pH值;具有可调节性。
用途:主要用于PAGE、WB、IP、CO-IP实验和蛋白与多肽的分离纯化。
8. WB/IP裂解液
原理:一种在非变性条件下裂解细胞或组织样品从而制备蛋白样品的裂解液,可高效溶解细胞蛋白,但不会像RIPA裂解液一样释放染色体组DNA或破坏蛋白复合物。
组分:20mM Tris(pH7.5)、150mM NaCl、1%TritonX-100、sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、EDTA、Na3V04、leupeptin等。
特点:裂解能力较为温和,可维持原有的蛋白间的相互作用。
用途:主要用于WB、IP、CO-IP实验。