组织由细胞和细胞外基质（ECM）有序而紧密地联结在一起。从组织中获取单细胞悬液，应用于流式检测、单细胞测序、体外培养药物筛选、细胞移植、类器官培养等方面，更接近体内的天然状态，具有很多优势。

要想获得高品质的单细胞悬液，需要采取一些有效措施，其中，酶消化法就是一种既能维持细胞的最佳状态、又能有效地获得单个细胞的方法。

消化组织的酶多种多样，常见的消化酶主要有7种，根据消化原理的不同，其应用场景也各不相同，下面我们就来具体了解~

一、胰蛋白酶

1．消化原理：胰蛋白酶会作用于赖氨酸或精氨酸结合的肽键，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨架从而分离细胞。

2．应用场景：用于消化细胞间质较少的软组织，如胚胎、上皮、肝、肾等组织，但不适用于纤维组织和较硬的癌组织。

3．注意事项：EDTA可以用来增强胰蛋白酶的水解功能，而血清则会影响胰蛋白酶的活性。

二、胶原酶

1．消化原理：胶原酶会水解细胞间质的脯氨酸从而分离细胞。由于它仅对细胞间质有消化作用，因此对细胞的损害小。

2．应用场景：

（1）胶原酶Ⅰ：消化上皮、肺、脂肪、肾上腺上皮细胞。

（2）胶原原酶Ⅱ：消化肝脏、骨、软骨、甲状腺、心脏、唾液腺组织细胞。

（3）胶原酶Ⅲ：可消化所有哺乳动物组织。

（4）胶原酶Ⅳ：可消化多种组织，通常用于胰岛细胞制备也可用于髓系细胞制备。

（5）胶原酶Ⅴ：消化胰岛小岛组织。

3．注意事项：钙镁离子和血清不会对胶原酶的活性及消化作用产生影响。

三、透明质酸酶

1．消化原理：通过随机降解透明质酸的 B-N-乙酰已糖胺-[1-4]糖苷键，来降低透明质酸的活性。

2．应用场景：常和胶原酶搭配，消化结缔组织。

3．注意事项：常规情况下的透明质酸酶较稳定，不会轻易分解。

四、中性蛋白酶

1．消化原理：中性蛋白酶只水解由亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸等疏水大分子氨基酸提供氨基的肽键。

2．应用场景：中性蛋白酶具有温和的蛋白酶水解活性，不会损坏细胞膜的完整性，它常与胶原酶等联合使用，用于分离纤维样组织的效率高于上皮细胞。

3．注意事项：大多数微生物的中性蛋白酶是金属酶，热稳定性较差很容易自溶，钙离子可以增加酶的稳定性，并减少酶自溶。

五、弹性蛋白酶

1．消化原理：作用于弹性蛋白的肽键、酰胺键和酯键将其水解，可水解天然的弹力素。

2．应用场景：常与胰蛋白酶和胶原酶等联合使用，用于分离结缔组织和含有大量细胞网状纤维的组织。很适合消化肺脏，分离肺泡II型细胞。

3．注意事项：作用的最适pH值7.8，最适作用温度25℃。

六、木瓜蛋白酶

1．消化原理：属巯基蛋白酶，可水解蛋白质和多肽中精氨酸和赖氨酸的羧基端，并能优先水解那些在肽键的N-端具有两个羧基的氨基酸或芳香L-氨基酸的肽键。

2．应用场景：常被用于分离皮层神经元、视网膜、平滑肌。

3．注意事项：最适合的pH值6~7;最适合的温度55~65℃，耐热性强，在90℃时也不会完全失活；受氧化剂抑制，还原性物质激活。

七、DNase Ⅰ

1．消化原理：作用于细胞分离降解出的DNA，避免DNA引发的细胞聚集，对细胞完整性无破坏作用。

2．应用场景：常配合胶原酶或透明质酸酶等联合使用，一般不会单独使用。

3．注意事项：EDTA等金属离子螯合剂、0.1%的SDS、DTT、疏基乙醇等还原剂、50-100 mM以上盐浓度均对DNase Ⅰ有显著抑制作用。