具体要看你培养的是什么细胞了,贴壁细胞长满至培养瓶底部80%左右就可以传代了,一般来说隔一天换一次培养基即可。如果细胞长得不好的话,一般增殖比较慢,贴壁不好,悬浮的死细胞比较多。对于悬浮培养的细胞要根据具体细胞的特性来判断长得好不好了,例如看细胞的形态是否正常。
生长正常的细胞在显微镜下,培养液干净,细胞边缘整齐(除个别的细胞系本身特性外),细胞浆(质)比较均匀,没有黑点或斑。细胞培养基一般三天换一次为好,或传代或培养。换液太勤,细胞系衰老过快。不管怎么样,根据细胞生长快慢,确定传代所需细胞数目及根据自己的实验进度调整传代细胞密度。
如何观察细胞?
培养细胞后,要时刻观察我们的细胞,无论是用眼睛还是显微镜观察,我们要了解他们的状态,每个实验的培养条件不同,只有时刻了解他们,及时调整,才能做好后续实验。
划重点: 必须熟悉培养的细胞的正常形态,每当拿到一个新的细胞株时,要尽可能多的观察并熟悉细胞的正常生长情况。
当我们从培养箱中拿出细胞培养瓶时:
1.注意看培养基的颜色 。多数培养基中都有酸碱指示剂,偏酸性显现黄色,偏碱性则呈紫色。如果培养基的pH值变化很大则考虑培养基是否被污染、或细胞生长过密、或细胞死亡过多、或是培养箱中CO2浓度调节出现了问题。
2.看培养基浓度。 培养基变浑浊时说明培养基被污染或是细胞生长过密。
3.看细胞状态。 丛生的细胞(悬浮培养)和游离的细胞(贴壁培养)。
如果用锥形瓶或培养皿培养细胞,那么在超净台内操作细胞前最好先在倒置显微镜的40倍物镜下观察细胞的生长情况。