细胞对一个实验来说至关重要，细胞培养失败，等于整个实验都白费了，那么如果珍贵的细胞被污染了，我们有什么解救办法吗？

细胞污染后的急救方法（细胞污染后怎么补救）

　　一、抗生素法：

　　细菌培养：用无抗生素完全培养液培养细胞3 d，收集上清离心后将沉淀物接种于血琼脂培养基， 35e培养。

　　所采用的抗生素包括临床常用的15种抗生素，抗生素最适抑菌浓度筛选：根据细菌药敏实验结果选出敏感抗生素，每种抗生素从最低抑菌浓度MIC到最高耐药浓度分别配制6个浓度梯度。将LSC-1细胞按1*104/孔种96孔板，细胞贴壁后加入含敏感抗生素的完全培养液，24 h后换无抗生素培养液培养1 d，如此重复3次，连续7 d。

　　二、抗生素联合巨噬细胞吞噬法：

　　将上述抗生素处理过的细胞再用小鼠的巨噬细胞处理。巨噬细胞的制备：将灭菌的玻璃粉与0. 9%氯化钠注射液混和注入小鼠腹腔， 3 d后脱颈处死动物，无菌操作取小鼠腹腔液，离心收集巨噬细胞，与LSC-1细胞混合培养， 3 d后换液，弃去巨噬细胞。间隔一周后再用巨噬细胞共培养一次。

　　三、裸鼠体内接种法：

　　将LSC-1细胞按1*106个/mL接种裸鼠腋下皮下，连续观察，当肿物长至约1cm3后，脱颈处死动物，无菌操作取出肿物，采取组织块法做组织细胞培养。

　　免疫组织化学鉴定：

　　将上述3种方法处理的LSC-1细胞种植在直径为15 mm的无菌圆形盖玻片上，贴壁后做角蛋白AE1 /AE3免疫组化染色、HE染色

　　细胞周期鉴定：

　　采用流式细胞仪测量碘化丙啶标记细胞的荧光强度，分析DNA含量。测试3种方法处理的LSC-1细胞周期，并与该细胞建系初期的第3代细胞状况做比对。

　　抗生素撤离观察：

　　用无抗生素的完全培养基培养3种方法处理的细胞，连续观察3周，取细胞上清做细菌培养。

　　细胞系的维持、冻存与复苏：

　　将无抗生素培养3周的细胞按常规方法冻存，并于1个月后复苏，观察细胞生长状态。

　　自建人喉癌细胞系LSC-1传至第12代以后，细胞生长速度变慢，已贴壁细胞变圆、漂起、死亡，细胞间隙出现可运动的微小生物，但培养液依然清亮不浑浊，收取上清液离心，将沉淀物行常规血琼脂培养， 24 h结果为无菌生长，培养5~7 d后开始出现灰白色细小菌落，光滑湿润，有透明溶血环，全自动细菌鉴定仪生化鉴定条检测为嗜麦芽寡养食单胞菌，该菌为非发酵革兰阴性杆菌。细菌药敏结果：在15种抗生素中，该菌仅对头孢他啶、哌啦西林、头孢哌酮/舒巴坦3种药物敏感，其余均耐药。

　　2.1 抗生素法除菌效果

　　经筛选， LSC-1细胞可耐受的抗生素最佳抑菌浓度分别为：哌啦西林64 mg /L、头孢他啶2 mg /L、头孢哌酮/舒巴坦32 mg /L。LSC-1细胞在哌啦西林和头孢他啶最佳抑菌浓度中分别传代一次，在头孢哌酮/舒巴坦中传代3次，并每种细胞各冻存3株。复苏情况：哌啦西林3株均未贴壁，头孢他啶两株复苏后贴壁，但生长一周后均出现细菌，细胞死亡;另一株第二次冻存，再次复苏后生长良好，但抗生素撤离后出现细菌，经鉴定仍为嗜麦芽寡养食单胞菌。头孢哌酮/舒巴坦3株复苏后均能存活，但生长缓慢，一周传代一次，仍有少量细菌，抗生素撤离后重又出现细菌污染。在3种抗生素中，头孢哌酮/舒巴坦抗菌作用和细胞生长状态最好，头孢他啶对细胞损伤较大，细胞表面粗糙，状态较差。

　　2.2 抗生素联合巨噬细胞吞噬法除菌效果

　　比较头孢哌酮/舒巴坦和巨噬细胞先后使用和二者交替使用的除菌效果，并观察细胞冻存复苏后的传代次数，具体方法为：头孢哌酮/舒巴坦32 mg /L培养1次、2次、4次后，再分别与巨噬细胞共培养2次，各冻存1株;头孢哌酮/舒巴坦和巨噬细胞交替培养3次，冻存1株。复苏后细胞状态：头孢哌酮/舒巴坦和巨噬细胞依次使用者中，抗生素使用次数较多的细胞传代次数较多(5代);二者交替使用的细胞状态更好于前3株细胞，且传代次数也最多(6代)。然而所有细胞最终因状态不佳或污染重现而死亡。

　　裸鼠体内接种法除菌效果

　　肿瘤细胞接种裸鼠体内40 d后开始出现肿块， 60d长至1 cm3左右。处死动物取出肿物，瘤体质量0. 39 g，体积为0. 8 cm*0. 6 cm*0. 4 cm。将组织块培养于含三抗的完全培养基， 14 d后改用无抗生素培养，持续培养3周，细胞生长良好。之后自然传代8次，冻存1个月后复苏，细胞仍能贴壁生长。取上清液做细菌培养，结果为无菌生长。

　　2.4 细胞形态及生物学特性

　　抗生素处理及裸鼠接种后的LSC-1细胞形态与LSC-1第三代基本相同，细胞呈多边形，有铺路石感。

　　免疫组织化学细胞角蛋白染色，裸鼠接种后的和抗生素处理的细胞均有AE1 /AE3阳性表达，但前者阳性比例(图1H)与第三代细胞(图1G)接近，后者阳性表达较少。

　　HE染色，接种裸鼠的LSC-1细胞具有高度的异型性：细胞形态及大小不等;核呈多形性：大小、形态及染色各异，胞核与胞质比例增大(接近1B1)，核仁粗大，数目增多，核分裂象增多，出现不对称、多极性等病理性核分裂，偶见巨核细胞，胞质有糖原颗粒，与LSC-1第三代细胞形态相一致。

　　2.5 细胞倍体状况及细胞增殖周期分析结果

　　用头孢哌酮/舒巴坦处理3次后， LSC-1细胞周期直方图虽为近二倍体图像，但S期、G2M期细胞峰较高，仍具有癌细胞的特点。裸鼠接种的LSC-1细胞呈现非整倍体图像，且二倍体和异倍体的S期、G2M期峰均较高，更接近第3代LSC-1细胞周期DNA含量分布。3种细胞各核型比例：裸鼠接种细胞仍保持二倍体和异倍体核型，分别占44. 92%和55. 08%，与第3代细胞(二倍体41. 52%、异倍体58. 48% )基本相同，而头孢哌酮/舒巴坦处理的细胞全部为二倍体，异倍体细胞消失。